Популар Постс

Избор Уредника - 2019

Шта је преимплантацијска дијагноза у ИВФ-у и шта показује?

У овом одељку ћете сазнати:

Припремајући се за процедуру ин витро оплодње (ИВФ), свака жена или брачни пар има одређени страх повезан са здрављем нерођеног дјетета. Заиста, нико не може предвидети како ће доћи до оплодње и како ће ембрион испасти здрав. Чак и неки апсолутно здрави парови (њихов удио је 5%) након зачећа, дијете са генетском болешћу или кромосомске абнормалности могу се природно родити, што чак и пренатални прегледи понекад не могу открити.

Срећом, данас постоје технике које вам омогућавају да идентификујете повреде у структури ембриона у првим данима његовог развоја. Пре свега, то је преимплантацијска генетска дијагноза у ИВФ-у. Размотримо детаљније шта је суштина такве студије.

Из назива процедуре већ је јасно да се ова генетска дијагноза спроводи пре имплантације ембриона, који је настао екстракорпорално, у матерницу жене. Са природном концепцијом ПГД се не спроводи.

ПГД анализа у ИВФ-у је високо технолошко истраживање које се проводи у најранијем периоду развоја ембрија - трећег или петог дана. Главна сврха поступка је да се изабере апсолутно здрав ембрион за даље пресађивање у материцу. Ова анализа се изводи на малој количини биолошког материјала и мора се извести у кратком времену.

Такође је важно напоменути да ПГД мора имати одговарајуће индикације.:

  • старост труднице је старија од 35 година
  • Старост будућег оца је изнад 45 година
  • у породици једног или оба будућа родитеља, исте онколошке или генетске болести преносе се из генерације у генерацију,
  • присуство мајке у медицинској историји смрти фетуса (или новорођенчета) због Рх-конфликта,
  • уобичајени побачај (побачај или заустављање развоја ембриона у раној трудноћи),
  • неуспешни покушаји ИВФ-а (више од три)
  • ниски мушки спермограми (ослабљена сперматогенеза, низак број спермија у семенској течности, висок број спермија са абнормалном структуром).

ПГД омогућава откривање и хромозомских абнормалности и генетских болести у ембриону. Није искључено да ће након ПГД (ПГД) дијагностике током ИВФ-а неколико насталих ембриона, пресађивање бити потпуно отказано због њиховог лошег квалитета (то се може догодити из различитих разлога). Што је жена старија, то је већи проценат одбацивања ембриона.

Студија као што је ПГД је дјелимично алтернатива пренаталној дијагностици, али је, наравно, не може у потпуности замијенити. Жене које постану трудне након ИВФ са ПГД-ом, као и све остале, треба да прођу рутинске ултразвучне прегледе и друге прегледе како би пратили интраутерини развој бебе.

Треба додати да данас у Русији постоји неколико центара у којима се процењују различити типови генотипова ембриона методом предимплантацијске генетске дијагностике ПГД у ИВФ - у Санкт Петербургу је то центар репродукције Генесис. Висока технолошка опремљеност, квалификација и дугогодишња пракса ембриолошких лекара, специјалиста за репродукцију, генетичари омогућавају неплодним паровима да постану сретни родитељи здравог дјетета.

ПГД - шта је то?

Од тренутка када се женско јаје стапа са човековом спермом, све је предодређено на генетском нивоу - боју и раст дјететове косе, интелектуалне способности и пол, као и могуће генетске абнормалности и болести које је дете наследило од родитеља, деда или других рођака .

Пре-имплантацијска дијагностика је комплекс геномских студија, који омогућава идентификацију у ембриону, који је стар само неколико дана, различитих развојних девијација, болести, синдрома и других проблема. ПГД је у стању да идентификује око 150 насљедних генетских обољења, међу којима су уобичајене - Довнов синдром, Турнер, и врло ријетко - цистична фиброза, хемофилија, синдром лептирастог крила итд.

Користећи специјалне технике и високопрецизну опрему, оболели ембриони се одређују и испитују. За трансплантацију у матерничну шупљину, жене користе само квалитетне, здраве и одрживе ембрионе.

Стандард ИВФ не укључује обавезну фазу дијагностике пре имплантације. Након оплодње и узгоја ембриона током неколико дана, процењују се само стопе раста, стопе дробљења и виталност ембриона. Након тога се преносе у матерничну шупљину жене. Која од њих ће се укоријенити и укоријенити уопште је велико питање. Ефикасност стандардног ИВФ-а је око 35%.

Ако се изврши дијагностика пре имплантације, будући родитељи можда неће бринути о здравственом стању бебе, чак и ако сами имају одређене генетске проблеме. Поред тога, ефикасност ИВФ-а са ПГД-ом је нешто виша - око 40-45%. То је због чињенице да велики ембрион, чак и ако је имплантиран у материцу, има врло мале шансе за развој и преживљавање. Здрав и испитан ембрион има већу шансу да стекне упориште и почне да расте и развија се.

Сврха истраживања

ПГД се снажно препоручује родитељима који имају генетске болести које дијете може наслиједити. Такав прелиминарни генетски преглед ембриона не би био повређен ако би у редовима блиских рођака будућих родитеља постојале наследне болести.

Дијагноза пре имплантације је важна и неопходна за парове у којима један од родитеља носи болест повезану са сексуалним хромозомом. На примјер, жена носи ген за хемофилију, али дијете ће бити болесно само ако је мушко дијете. ПГД у овом случају одређује пол ембриона који су стари само неколико дана, а лекари бирају само ембрионе који нису угрожени хемофилијом, односно девојкама, за пресађивање.

Жена са негативним Рх фактором и неколико трудноћа у прошлости (није важно како су завршили), препоручује се ПГД, ако је сперма мужа са позитивним Рх фактором коришћена за ин витро оплодњу. У овом случају, лекари ће од свих насталих ембриона изабрати само оне који су наследили мајчински Рхесус идентитет. У овом случају, трудноћа након ИВФ ће се наставити са мањим ризиком, а беба неће бити изложена ризику од хемолитичке болести.

ПГД се препоручује пару ако је жена раније имала два или више побачаја, ако је било случајева пропуштеног побачаја, као и ако било који од супружника у првом браку или заједно имају дете са кромосомским абнормалностима или генетске патологије. Дијагностика пре трансфера омогућава да се из броја ембриона који се сматрају за трансплантацију искључе они који су болесни или имају аномалије не-генетског порекла.

Пре-имплантацијска дијагностика у другом или трећем ИВФ протоколу омогућава да се са великом прецизношћу утврде узроци неуспјелих претходних покушаја.

И потпуно нестандардна, али, нажалост, стварна ситуација - родитељи одлазе у ИВФ да имају бебу која може постати донатор, на пример, коштане сржи, за свог старијег брата или сестру. У овом случају ослањање на природно зачеће је превише ризично. Рођено дијете можда није прикладно као донатор за болесног рођака.

Пре-имплантацијска дијагностика ће помоћи да се одаберу појединци из резултирајућих ембрија одређеном комбинацијом генетске информације која гарантира геномску подударност између дјеце. Ова студија се назива ХЛА типизација.

Шта показује истраживање?

Пре-имплантацијска генетска дијагностика вам омогућава да унапријед идентификујете различите болести и стања у којима дијете може бити неодрживо или онеспособљено. Све зависи од препорука генетичара. Ако је потребно, ембриони се испитују само за одређене критеријуме и мутације гена, али генерално постоји могућност процене свих параметара одређених студијом.

На пример, ПГД са тачношћу од 97-99% одређује слепило и глувоћу, урођену глухоћу, ретинобластом, Фанцони анемију, неурофиброматозу, фенилкетонурију, миопатију, торзиону дистонију, мишићну дистрофију Дуцхене и неколико десетина других опасних и неизлечивих болести и синдрома.

ПГД такође одређује кариотип ембриона, његову крвну групу и Рх фактор, пол, присуство мутација на нивоу гена, необично за родитеље и први пут се манифестује.

Ко је прописан?

Пошто сама дијагностика пре имплантације није јефтино задовољство. Не препоручује се свака жена која се усудила на ин витро оплодњу. Нуди се свима, али постоје категорије пацијената који су веома непожељни због одбијања прелиминарне генетске процене ембриона пре трансфера у материцу.

Ови пацијенти укључују:

  • "Аге" жене и парови. Са годинама, мушке и женске полне ћелије старе и губе здравље. Под утицајем дрога, лоших навика, неповољне екологије и само протеклих година, њихов ДНК скуп може мутирати. Према томе, код жена и мушкараца у “узрасту”, ризици феталних кромосомских абнормалности су већи. ПГД се препоручује женама старијим од 35 година, као и паровима у којима је мушкарац старији од 40 година.
  • Рх-негативне женекоји су имали абортусе, побачаје, порођај, деца су рођена са хемолитичком болешћу. Дијагноза је релевантна само ако супружник има позитиван фактор крвног резуса. Ако се користи донорска сперма, онда се мушки биоматеријал иницијално бира са негативним Рх фактором, а вероватноћа добијања Рх позитивних ембриона је нула.
  • Жене које већ имају искуства са 1-2 неуспјешних покушаја ИВФ-а у недостатку објективних разлога (протоколи су спроведени коректно и без компликација, нема ендометриозе и других препрека имплантацији).
  • Ако се мушка сперма користи за оплодњу са ниским показатељима квалитета сперме (тератозооспермија, азооспермија, астеноозоспермија). Природним зачећем умиру ниско-квалитетне сперме, немају шансе за оплодњу, ИВФ-ом могу добро оплодити јаје, јер је нарушена природна селекција, што може довести до развоја различитих патологија у фетусу.

Врсте дијагностике

Постоји неколико типова генетске дијагнозе ембриона. Разликују се у смислу истраживања, техничких нијанси, опреме и метода истраживања. Ми набрајамо главне без уласка у лабораторију и генетске детаље:

  • ФИСХ - Ово је метода флуоресцентне хибридизације. Ово је прилично стандардна студија, чији је трошак низак у поређењу са другим методама предимплантацијске дијагностике. Али њена прецизност је нешто нижа него код других метода. Овај метод се широко користи у клиникама у Русији, Украјини и Белорусији. Стране клинике практично су је напустиле због чињенице да су се појавиле прецизније студије. Плус чињеница да се студија одвија брзо - у року од неколико сати. Лоша страна је да многи хромозоми нису чак ни истраживани.
  • ЦГХ - компаративна метода геномске хибридизације. Врло скуп начин. И финансијски и привремено. Али листа идентификованих патологија је већа од оне горе описане методе, а тачност је неизмјерно већа. Између осталог, овај метод дијагнозе пре пресађивања вам омогућава да одредите који ембриони имају веће шансе за имплантацију.
  • ПЦР - метода ланчане реакције полимеразе. Открива Рхесус идентитет ембриона, његову крвну групу, као и прилично велику листу генетских проблема. Студија захтева обавезно прелиминарно испитивање биолошких родитеља за генетске мутације. Ако жена добије донаторски ембрион или се доносе ооцити за оплодњу, ПЦР метод се не може користити.
  • Нгс - метода секвенцирања. То је савремена метода предимплантацијске дијагностике, која комбинује најбоље од свих горе наведених. Међутим, она даје најкомплетнију слику здравственог статуса ембрија, а његова цијена је виша од цијене других метода.

Како иде истраживање?

Да би ембриолози и генетичари имали способност да раде ПГД, мора се добити довољан број јаја кроз претходну хормонску стимулацију. Ако је мање од 3-4, онда се дијагноза обично не спроводи. Након што лекари "организују" састанак јаја са прочишћеном спермом, развој ембриона прати се 2-5 дана. Тада ембриолог може да изабере најодрживије. Петог дана, бластоцисте већ имају око 200 ћелија. Могуће је, без предрасуда према ембриону, узети 5-7 ћелија из сваког ембриона за генетичка истраживања.

За сакупљање ћелија користе се модерни ласери високог степена прецизности, ћелијске љуске су биопсоване и користе се друге методе. Истраживање ДНК ланца пружа свеобухватне информације о томе да ли је ембрион здрав. Након тога се препоручује за трансфер.

Ако се пар слаже са прелиминарном генетском дијагнозом ембриона, сам пренос ембриона може бити одложен. Ако се стандардним ИВФ протоколом спроводи 2, 3 или 5 дана од момента оплодње, онда се могу очекивати резултати ПГД-а од неколико сати до 5-6 дана. Дакле, ИВФ циклус се продужава за најмање недељу дана. Трошкови протокола могу се повећати у случају пристанка на прелиминарну дијагнозу ембриона за 40-240 хиљада рубаља.

Све зависи од тога колико ембриона планирате да испитате, који метод ће бити тестиран.

Да би се смањили трошкови, пар може користити алате за квоте, дијагностика је укључена у листу услуга које ОМС може пружити, али свака клиника би требала појаснити ово питање посебно. Неки раде ПГД на рачун буџета, други - не.

Могуће компликације

Као што је већ поменуто, материјал за проучавање генетике се добија биопсијом. Упркос ултрамодерној прецизној опреми, још увек постоји могућност повреде фетуса током ове процедуре. Најчешће повређени су подложни "три дана". Треба напоменути да је вероватноћа повреде прилично ниска - око 3%, а користи од студије ће бити много веће. У супротном, компликације са овим ИВФ могу бити исте као код ИВФ у стандардном протоколу.

Било која од фаза ин витро оплодње може бити повезана са одређеним ризицима, а то неће никуда ићи. Важно је да су сви ризици ниски.

Пар мора бити свјестан да чак и модерни и прецизни инструменти којима лијечници највише категорије квалификација не гарантују 100% да ће дијете бити здраво. Тако, уз обиман мозаицизам, могу се појавити биолошке грешке, а болесни ембрион се може пренети на жену. Ова вероватноћа је, али је веома мала - не више од 0,05%.

Према званичним подацима Светске здравствене организације, ИВФ са ПГД повећава шансе за успех протокола за око 7-10% у односу на основни 35%. Међутим, нема много позитивних рецензија у руском сегменту Интернета о предимплантацијској дијагностици.

Неке жене примећују да је стопа преживљавања ембриона из којих су ћелије узимане за анализу нешто лошија, па стога има доста прегледа неуспешних ИВФ протокола са прелиминарном генетском дијагнозом фетуса. Овај лек не потврђује ово јавно мишљење, а званична статистика статистике не указује на смањени проценат успешне имплантације након прегледа ембриона.

Жене често питају да ли је могуће направити ИОП за избор пола дјетета, јер поред чињенице да заиста желим дјецу, још увијек желим сина или кћер. Техничка способност да се одреди пол постоји, али ниједан лекар неће издвојити ембрионе „непотребног“ пола, осим ако не постоји специфична индикација о генетици (за болести повезане са сполним хромозомом). Дискриминација ембриона по полу је забрањена законом у Русији.

Према критикама, сам процес дијагностике, који може трајати неколико дана, даје женама многа искуства, јер она до сада не зна колико је квалитетних ембриона испало и да ли су се уопште испоставили. Помимо того, ей нужно поддерживать состояние эндометрия в нужной форме -принимать назначенные лекарства, сдавать кровь на прогестерон, делать несколько УЗИ, чтобы определить толщину функционального слоя матки. Это важно, чтобы перенос прошел максимально успешно и плодное яйцо смогло имлантироваться.

Случается, что пока идет диагностика, «удачное» для переноса время проходит. У овом случају, протокол се може прекинути, а ембриони који су прошли тест замрзнути су и послани у криобанку. Пренос ће бити у следећем протоколу.

О замршености преимплантационе генетске дијагнозе погледајте следећи видео.

лекар, специјалиста психосоматике, мајка четворо деце

Шта је ПГД

Кромосомски сет јајета или ембриона се проучава у лабораторији. С обзиром на рани развој ембриона, ризик од повреде се смањује на 1%. Процедура је прописана паралелно са главним третманом предвиђеним протоколом. Међутим, потребно је више фоликула, тако да се хормонска стимулација јајника спроводи у интензивнијем режиму.

Нису све хромозомске мутације код родитеља опасне по здравље дјетета. Развој патологије зависи од знакова и комбинације гена код маме и тате.

Постоје два типа мутацијских знакова: доминантни и рецесивни. Пренос доминантног мутантног гена на бебу повећава ризик од патологије код детета за 50%. Ако су родитељи носиоци рецесивне особине, тада ће се појавити генетска болест када се оба „болесна“ гена маме и тате пренесу на бебу.

Поред тога, неке генетске патологије повезане са сексом. Дакле, женски двадесет трећи хромозомални пар изгледа као КСКС, а мушки КСИ. Стога, повреде у једном хромозому жена неће узроковати болест, јер ће друга блокирати њено дјеловање. Здраво рођено дијете ће наставити "носач" неисправног хромозома.

Мушкарци немају такву заштиту, па ће их дечаци родити генетском патологијом, а девојчице у пола случајева постаће носиоци “дефектног” хромозома.

Користећи пред-имплантациону генетску дијагнозу ембриона, генетика успоставља специфичну комбинацију коју ембрион наслеђује. Добијене информације нам омогућавају да утврдимо да ли је дете рођено са патологијом или ће само постати носилац хромозомског дефекта. Испитивани су сви ембриони добијени од којих су одабрани најчистији.

Ова анализа не би требало да се помеша са пре-имплантационим генетским скринингом. Разлика између ПГД и ПГС је значајна. ПГД се спроводи да би се идентификовале неизлечиве генетске патологије и минимизирали ризици појаве болесног дјетета. ПГС је студија која вам омогућава да одредите број хромозома, анеуплоидија која је компатибилна са рођењем и феталним развојем ембриона. Једноставно речено, задатак АСГ-а је да повећа шансе за трудноћу избором здравих ембриона. Родитељи којима је прописана ПГС немају никакву патологију насљедног типа, али постоји ризик од њихове појаве.

Дакле, процедура ин витро оплодње се спроводи заједно са ПГД-ом за те сврхе:

  • "Спречити" ембрионе који имају дефектне гене да поново засију,
  • Сазнајте зашто су претходни ИВФ протоколи завршени без успеха,
  • Смањење ризика од добијања бебе са патологијом родитеља домаћина,
  • Одредите пол бебе, елиминишући хромозомске абнормалности по полу,
  • Идентификовати ембрионе који имају предиспозицију за патологије генетског типа,
  • "Пронађите" ембрион који је оптималан са ХЛА системом са другом децом из породице која може постати донатор током њиховог третмана,
  • Смањити вјероватноћу побачаја у раним фазама,
  • Смањити могућност хемолитичке болести,
  • Изаберите један “идеалан” ембрион, елиминишући могућност вишеструке трудноће.

Генетска дијагностика може идентификовати и елиминисати такве опасне патологије:

  • Таи-Сацхсова болест,
  • Анемија српастих ћелија,
  • Гауцхерова болест,
  • Вердниг-Хоффманова болест,
  • Ретинобластом,
  • Хореи Хунтингтон,
  • Довнов синдром,
  • Неурофиброматоза,
  • Хемофилија,
  • Миопатхи
  • Ацхондропласиа,
  • Фенилкетонурија,
  • Алперсов синдром,
  • Болест полицистичних бубрега
  • Дуцхеннеова мишићна дистрофија,
  • Ретинитис пигментоса,
  • Готтингтонова болест,
  • Диусхен Миодистропхи,
  • Цистична фиброза
  • Анемиа Фанцони,
  • Глуво-нијеми
  • Торзиона дистонија,
  • Пемпхигус,
  • Едвардсов синдром.

Ова листа није ограничена на приказане патологије: постоји их више од 150 врста.

Имајте на уму да се евидентирају случајеви лажних негативних резултата. Чињеница је да неке методе истраживања дијагностикују само одређени број хромозома. "Необраћени" гени могу бити неисправни.

Понекад постоји мозаички развој мутација. Током истраживања, ћелија се дијагностикује као здрава, а мутација се јавља током њеног развоја.

Када је ПГД неопходан?

Већ смо рекли да ПГД није учињен свим пацијентима који су се пријавили за ин витро оплодњу. Постоје одређене индикације за поступак:

  • Родитељи су носиоци хромозомских дефеката, тако да је ризик од преноса генетских абнормалности код беба веома висок. "Носач" обезбеђује присуство хромозомских преуређења или моногених болести.
  • Старосна категорија родитеља: мајке старије од 36 година, очеви чија је старост преко 40 година. Што су старији супружници, већи је ризик развоја мутација гена, чак и ако потенцијални родитељи имају “прави” сет хромозома.
  • Након претходних трудноћа, рођена су дјеца која су умрла од Рх-конфликта.
  • Неисправни гени и хромозоми су идентификовани у јајима и сперми.
  • Спермограм је идентификовао озбиљне абнормалности код мушкарца (патологије као што су азооспермија или олигозооспермија),
  • Претходни покушаји да се затрудни са ИВФ-ом су били безуспешни,
  • Појава трудноће завршава се побачајима у раним фазама развоја ембриона,

С обзиром на импресивну листу генетских болести, ПГД за ИВФ се врши свим женама чије су године прешле тридесет пет година. Разлог за то су промјене везане уз године које могу донијети неугодна "изненађења" чак и тијеком природне трудноће. Старење јаја се убрзава и погоршава таквим факторима:

  • Дуготрајна терапија јаким лековима
  • Животни стил у прошлости повезан са конзумацијом алкохола, никотина, дрога,
  • Хронична патологија,
  • Опасни услови професионалне активности,
  • Бад ецологи.

Генетска дијагноза је приказана у таквим случајевима:

  • Рођење бебе је повезано са добијањем одговарајућих матичних ћелија компатибилних са ХЛА системом да би се излечило старије дете,
  • Некомпатибилност
  • Супружници су блиски рођаци,
  • Пар је био изложен зрачењу.

ИВФ са ПГД значајно повећава трошкове протокола. Стога жена самостално одлучује о потреби за студијом. Подсјетимо се да је оплодња ин витро само у 20-40% случајева завршена трудноћом. Генетска дијагноза неће само идентификовати могуће мутације гена, већ ће значајно повећати шансе за успешну концепцију.

Припрема и спровођење ПГД са ИВФ

Припрема за пре-имплантацијску генетску дијагнозу ембриона укључује консултације и потпуни преглед брачног пара са одговарајућим индикацијама. Лекар детаљно описује предности и недостатке процедуре. Жени је објашњено да генетска дијагностика захтева већи број зрелих јаја. Због тога ће се интензивирати хормонална стимулација јајника, што повећава ризик од прекомјерне стимулације током ИВФ. После свих дијагностичких мера, пређите на ПГД процедуру.

Састоји се од седам фаза:

  1. Вађење јаја и њихова оплодња у лабораторији,
  2. Фетални развој који траје 3-5 дана,
  3. Избор "најбољих", најиздржљивијих ембриона,
  4. Екстракција ћелија из биопсијског ембриона,
  5. Фиксирање бластомера,
  6. Хибридизација,
  7. Декодирање примљених информација.

Још једном подсећамо да студија неће утицати на здравље ембриона: органи и ткива нерођеног детета "не учествују" у поступку.

Након дешифровања, генетичар раздваја погодне и "дефектне" ембрионе. Ако се открију 2 хромозома који задовољавају стандарде, тада се такви ембриони подвргавају поновном засађивању. Развијање јаја са поремећеним абнормалностима не може се имплантирати.

ПГД методе

Савремена репродуктивна технологија врши ПГД ембриона на 4 начина:

Размотрите специфичности сваке технике.

Молекуларна цитогенетичка метода је друго име методе. Широко се користи у пост-совјетском простору, има нај демократичнију вриједност. Значајан недостатак флуоресцентне ин ситу хибридизације (рибе) је нетачност дијагнозе, јер овај метод испитује само део хромозома.

За ПГД методу риба ће трајати 5 сати. За то време генетичар ће одредити следеће важне факторе:

  • Хромозомска секвенца
  • Гендер баби,
  • Присуство најчешћих генетских абнормалности.

Метода се назива компаративна геномска хибридизација. Требат ће много више времена и коштати више. Међутим, техника има низ важних предности које га разликују од других типова истраживања:

  • "Проналази" најиздржљивије ембрионе са најбољим потенцијалом за имплантацију,
  • Тестира много матичних ћелија, што значајно смањује ризик од погрешне дијагнозе,
  • Дијагностичке мере се врше са замрзнутим јајима која ће се пренети у криопротокол.

ПЦР је ланчана реакција полимера. У стању је да "пронађе" не само дефекте у функционисању хромозома, већ и моногене патологије. Користећи ПЦР, одређена су антитела родитељске некомпатибилности и Рхесус ембриона.

Важан услов прије провођења истраживања је обавезна дијагноза родитеља за присуство мутација гена. Таква студија ће елиминисати грешке у дијагностици патологије настале мутацијом ћелија.

ИВФ помоћу донорског јајета не омогућава студију помоћу ПЦР.

Секвенцирање високе пропусности је најнапреднија дијагностичка метода ПГД. Секвенцирање садашње генерације је најскупља и најефикаснија генетска дијагноза која вам омогућава да истражите свих 23 пара хромозома. Извршена је целокупна геномска анализа, јер се током студије испитује исправност секвенце ДНК.

Трошкови генетске дијагнозе

ИВФ захтева озбиљну потрошњу. Генетска дијагностика повремено повећава цену, јер су опрема и материјали за процедуру веома скупи.

Немогуће је дати недвосмислен одговор колико кошта ПГД, јер цена студије зависи од неколико фактора:

  • Дијагностичка метода
  • Број испитиваних ембриона,
  • Коришћење додатних тестова,
  • Студија хромозомске транслокације.

Цена дијагнозе зависи од броја испитиваних аномалија.

У Москви, цијена ПГД-а по ембриону је од 25.000 до 30.000 рубаља. За свеобухватну анкету морате платити од 100.000 до 250.000 рубаља.

Релевантност ПГД анализе

Главна предност ПГД дијагностике је да се све медицинске процедуре проводе прије трудноће, док је фетус још увијек изван материце. Анализа је релевантна за парове са повећаним ризиком да ће ембриони имати озбиљне хромозомске абнормалности које ће изазвати:

  • побачај
  • проблеми са имплантацијом
  • фадинг прегнанци
  • рођење дјетета које ће имати интелектуалне или физичке потешкоће.

Цитат: "Правовремени ПГД ембриона помаже у спречавању проблемских ситуација, много пута повећава шансе да ће трудноћа завршити рођењем здраве бебе."

Марина В. Шапневскаја, ембриолог клинике „За рођење“

Занимљиво је да ИВФ са ПГД омогућава планирање чак и пол фетуса.


Скупљање ћелија за ПГД анализу

Индикације за ПГД са ИВФ

Не сви парови који одлуче да се подвргну ИВФ-у, раде ПГД дијагностику. За ову врсту истраживања постоје строге медицинске индикације. По правилу, супружници који имају висок ризик преношења опасних генетских поремећаја дјеци постају кандидати за преимплантацијску анализу.

Главни циљеви ПГД-а у ИВФ-у су:

  • скрининг ембриона са абнормалностима кариотипа,
  • минимизира ризик преноса ембриона у шупљину материце, који ће имати генетске абнормалности,
  • правовремено откривање ембриона који имају предиспозицију за тешке генетске поремећаје,
  • утврђивање пола нерођеног детета ради спречавања преношења болести повезаних са полом,
  • утврђивање разлога зашто се имплантација није десила у претходним покушајима ин витро оплодње,
  • идентификацију Рх фактора ембриона како би се искључило рађање детета са хемолитичком болешћу,
  • обављање ХЛА-типизације, ако будуће дете треба да постане донатор за старијег брата или сестру.

Истраживање добијеног биолошког материјала

Индикације за дијагнозу ембриона пре ИВФ су:

  • старост жене је преко 35 година, а мушкарац је старији од 40 година,
  • абнормалности сперматогенезе,
  • један од супружника је носилац кромосомских или генетских патологија у заметним ћелијама,
  • више неуспешних покушаја ИВФ-а,
  • уобичајен побачај код жена (ако постоје два или више побачаја у историји),
  • фетална смрт током претходне трудноће због Рх-конфликта.

Методе пред-имплантацијске генетске дијагностике ембриона

ИВФ са ПГД може укључивати само јаја или готове ембрионе. Ова друга опција је пожељнија, јер је информативна што је више могуће - постоји само женски генетски материјал у јајној ћелији, а оба родитеља у ембриону.


Узорковање материјала за ПГД анализу се обично изводи 3. дана

Током анализе, врши се биопсија једног бластомера у ембриону од четири до десет постојећих који су у фази расцепа. То се обично дешава трећег дана. Извршене манипулације не утичу негативно на будући фетус.

Када су ембриони проверени (траје до два дана), преносе се у утеринску шупљину, као у уобичајеном ИВФ протоколу. Важно је да се пресађивање врши најкасније петог дана развоја људског тела.

Ако се користи криопрезервација, онда је дијагностички потенцијал ПГД шири. Дакле, ако узмете биопсију, а затим сачувате ембрионе, можете обавити све неопходне студије без журбе и поново пресадити следећи циклус.

Методе за ПГД ембрионе

Постоји неколико ефикасних метода преимплантацијске дијагностике:

  • ФИСХ. Важно је ако треба искључити присуство структуралних или нумеричких кромосомских абнормалности - транслокације и анеуплоидије. Материјал добијен током биопсије се преноси на стаклену плочицу, загрева до одређене температуре, а затим се постепено хлади. У овом случају, љуска је сломљена, цитоплазма излази. Сегменти ДНК обележени су специјалним бојама - флуоресцентним сондама. Након тога, употребом флуоресцентног микроскопа, генетичар може да изброји број хромозома, проверите да ли међу њима има неких абнормалних.
  • Нгс. Ово је најновији ПГД дијагностички метод у криоциклу, помоћу којег можете темељито прегледати 23 кромосомска пара. Тачност података добијених коришћењем НГС-а је 99,9%, односно грешке су мале. Технологија такође омогућава да се детектују хромозомске и моногене аномалије, мутације, да се разликује транслокација од здравог хромозомског скупа, чиме се елиминише потреба за биопсијом бластомера.
  • Ланчана реакција полимеразе (ПЦР). Техника која има за циљ да идентификује специфичне копије ДНК. Да би се то урадило, прво се денатурира да се одвија дупла нит. Затим узимају један фрагмент, додају му специфичне ензиме и полако удвостручују количину генетског материјала. То омогућава истраживачу да види дефектне нуклеотидне зоне. ПЦР метода је приказана када је неопходно искључити преношење моногених болести на дете (ако је један од њихових партнера или обоје од њих носиоци нездравих гена или имају клиничке манифестације опасне генетске патологије).

Треба напоменути да методе ПГД у ИВФ-у нису стопостотно замјењиве. Свака од њих је дизајнирана да идентификује специфичне групе болести. Према томе, само доктор може да одлучи који од метода је погоднији за брачни пар који се обратио њему.


ПГД - гаранција за рођење здраве бебе

ПГД ембриони - трошкови услуга

ПГД ембриона за ИВФ је прилично скупа услуга. У московској клиници „За рођење“ цена се креће од 83.500 до 90.500 рубаља. Ова процедура је веома сложена и укључује употребу скупе опреме и иновативних потрошних материјала. Да би га спровели могу само стручњаци највишег нивоа.

У клиници „За рођење“

Релативно висока цијена генетске дијагнозе прије имплантације повезана је са сложеношћу манипулација. Ако пратите понуде специјализованих клиника, ПГД се може проследити под повољнијим условима.

Новац који се плаћа за ПГД анализе увијек се исплати - на крају крајева, у питању је рођење здравог дјетета. Третман и одржавање бебе са озбиљним генетским абнормалностима родитељима троше много већу количину.

Опасно ли ЭКО с ПГД?

Преимплантационная генетическая диагностика применяется во всем мире. Ее безопасность научно доказана. Биопсия осуществляется только на том этапе развития эмбриона, когда его клетки еще не дифференцированы. То значи да ће са даљим дробљењем уклоњена ћелија бити замењена другим без икаквих последица за будући фетус.

ПГД не повећава вероватноћу развојних дефеката код детета, већ напротив, гарантује рођење здраве бебе.

Они су урадили пгд у НГЦ у Санкт Петербургу, читав протокол је такође био тамо. Мој муж и ја смо стари (38 и 40 година), веома забринути! И за добар разлог. Доктор Гвасалиа је рекао да је у нашем случају пгд практично обавезна процедура. Проверена су четири ембриона, процедура је открила најздравије: два су засађена. Одрастао два месеца. )
Процедура је невероватна и веома корисна !! Наравно, бринули смо се да је биопсија опасна, али у НГЦ-у су нам све објаснили, чак су показали и видео о том процесу, и заиста нема ништа лоше у томе, само предности! Још увек постоје различите методе пгд, изабрали смо НГЦ. Према речима лекара, најпрецизнији.
>> ПГД не повећава вероватноћу развојних дефеката код детета, већ, напротив, гарантује рођење здраве бебе.

Истина је! Користимо модерну технологију, ми смо у 21. веку))

Општи концепти

Пре-имплантацијска генетска дијагностика омогућава свеобухватно испитивање и искључивање присуства хромозомских абнормалности уопште или једног специфичног одступања. Недавно је паралелно са раним дефектима извршен и скрининг гена који могу изазвати појаву тумора у одраслом добу (јајници, црева, груди).

У случају преношења геномских болести код мајке, врши се биопсија неколико поларних јајних ћелија пре оплодње. Описане методе представљају алтернативу раној пренаталној дијагностици, која вам омогућава да спријечите прекид трудноће, ако изненада фетус има генетску патологију.

Пре-имплантацијска генетска дијагноза вам омогућава да одредите пол будуће бебе већ у процесу скрининга. Користи се за спречавање развоја аномалија повезаних са сексом.

Ко је приказан?

Предимплантацијска генетска дијагностика (ПГД) се изводи у следећим случајевима:

  1. Присуство једног или оба наследна обољења или промене у кариотипу. Често, сами партнери знају за своје проблеме, рјеђе - сазнаће у процесу скрининга.
  2. Уобичајени побачај. Проблем са овим нијесу аномалије од стране родитеља (оне можда уопште нису), већ генетске мутације фетуса које изазивају побачаје.
  3. Старосна доб особа које пролазе кроз ИВФ програм је преко 38 година.
  4. Више од 3 неуспјешна покушаја ин витро оплодње у повијести.
  5. Мушка неплодност.
  6. Укључивање ИЦСИ (интрацитоплазматска ињекција сперме) у програм оплодње. Процес је препун развоја генетских абнормалности у ембриону.
  7. Случајеви проклизавања у историји.

ПГД Феатурес

Истраживања у области пре-имплантацијске генетске дијагнозе указују на то да метода има право да постоји, помаже у дијагностицирању и спречавању хромозомских абнормалности, међутим, захтева даље побољшање.

Значајке ПГД су:

  • стопа побачаја при скринингу је нижа него без ње,
  • Тренутно нема доказа да се могућност трудноће повећава,
  • постоји могућност лажног резултата: ембрион је здрав, а резултат показује абнормалности, ембрион је болестан, а студија показује другачије (5-10% случајева).

Спровођење предимплантацијске генетске дијагностике (испитивање бластомера)

Након договора о ин витро оплодњи, репродуктолог процењује потребу за ПГД брачног пара. Ако постоје докази, партнери се могу договорити или одбити поступак. Потом је потписан документ којим се потврђује дозвола за спровођење анкете.

Трећег дана након оплодње ембриона генетичар узима једну од формираних ћелија бластомера за анализу. Верује се да то нема ефекта на фетус, пошто су све ћелије међусобно заменљиве.

Специјалиста спроводи истраживања у једној од претходно изабраних области: проучавање структуре ћелије под специјалним флуоресцентним микроскопом, проучавање ДНК, методом ланчане реакције полимеразе, за утврђивање присуства мутације.

На основу резултата, ембриони који имају аномалије неће се користити у процесу имплантације. Избор здравог и квалитетног. Тада се један или више њих преноси у матерничну шупљину мајке.

Са биопсијом поларног тела, испитује се скуп хромозома мајке. Спроводи се у случају да женска линија открије присуство генетски детерминисане патологије. Процедура вам омогућава да утврдите да ли је јаје здраво, које ће се користити за ђубрење, без нарушавања његове структуре. Ако се не идентификују аномалије, може се користити за оплодњу и прелазак у шупљину материце.

Постоје случајеви када се поларна тела приказују, а затим бластомери. То вам омогућава да добијете поузданији резултат. Шему по којој ће се испит полагати одабире генетичар.

Методе које се користе

Нумерички и структурни поремећаји хромозома одређени су методом флуоресцентне хибридизације. Овај метод вам омогућава да одредите ДНК секвенцу ћелије. Користе се посебне ДНК сонде које су по својој структури комплементарне регије за ДНК зоне бластомера.

Сонда садржи нуклеотид и флуорофор (молекул способан за флуоресценцију). Након интеракције циљне ДНК са ДНК сондом, формирају се осветљене површине, које се посматрају под флуоресцентним микроскопом.

Такође се користи метода ПЦР (ланчана реакција полимеразе). Састоји се од копирања дела ДНК помоћу ензима у одређеним лабораторијским условима.

Дијагноза анеуплоидије

Ово је једна од метода предимплантацијске генетске дијагностике, која омогућава детекцију присуства нумеричких хромозомских абнормалности (за одређивање додатних или несталих хромозома).

Генетски материјал се састоји од 46 хромозома, од којих половину даје отац, а друга половина мајке. Ако ембрион добије додатни хромозом, он се зове трисомија, а губитак било какве моносомије. Ови недостаци могу довести до следећих последица:

  • нема имплантације ембриона
  • спонтани побачај,
  • наследне патологије (Довн синдром, Клинефелтер, Схересхевски-Турнер).

Мушка неплодност и старост брачног пара су чести фактори у развоју таквих аномалија.

ПГД моногене патологије

Пре-имплантацијска генетска дијагностика ембриона да би се утврдило присуство моногених болести се спроводи у породицама у којима се утврђују наследне аномалије. Ако пар већ има бебу са хомогеном болешћу, онда се могућност да се друго болесно дете повећа неколико пута.

Разлог је кршење секвенце хромозома на одређеном делу ДНК. Ове болести укључују:

  • цистична фиброза,
  • адреногенитални синдром
  • фенилкетонурија,
  • хемофилија
  • анемија српастих ћелија,
  • Верниг-Хоффманов синдром.

Предности и ризици методе

Преимплантацијска генетска дијагностика, чији се прегледи сматрају нејасним, има одређене предности у области пренаталног скрининга:

  • Само висококвалитетни и здрави ембриони преносе се у материцу,
  • смањује ризик од бебе са генетским абнормалностима,
  • двоструки ризик од побачаја,
  • удвостручио ризик од вишеструке плодности,
  • шанса за имплантацију ембриона повећава се за 10%,
  • 20% повећање шансе за успешно рођење бебе.

Ризик од случајног оштећења ембриона ПГД-ом је 1%. Вероватноћа погрешног резултата је 1:10, поред тога, 3% од могућности да се ембрион са било којом аномалијом оцени као здрав.

Вероватноћа да ће се здрави ембрион разликовати према резултатима је 1:10. Могућност 1: 5 да ће трансфер ембриона у материцу бити отказан због абнормалности које се налазе у свакој од њих.

Контраиндикације

Пре-имплантацијска генетска дијагностика (ПГД), чије последице за ембрион нису прецизно идентификоване, има бројне контраиндикације за:

  • фрагментација ембриона више од 30% (формирање фрагмената до 25% сматра се нормалним),
  • присуство вишеструких бластомера у ембриону,
  • ембрион има мање од 6 бластомера трећег дана свог развоја.

Безбедност методе

Дијагноза се одвија у раној фази стварања будућег организма, када су све његове ћелије полипотентне, тј. Из сваког се може формирати пуноправни здрави организам.

Све стадије ПГД-а не изазивају време за ембрион, фетус и нерођену бебу. Након добијања узорка за испитивање, припрема се на посебан начин. Ћелије су постављене на стаклену плочицу на којој су фиксиране или у пуферу.

Трошкови поступка

На први поглед, пре-имплантацијска генетичка дијагностика, чији трошак варира од 50 до 120 хиљада рубаља, чини се скупом манипулацијом. Међутим, здравље и лијечење дјетета с генетски одређеним патологијама коштат ће много више.

Ова процедура даје све предности над женама које могу да доживе дете на природан начин, јер им таква дијагностичка метода није доступна. Пре-имплантацијска генетичка дијагностика, чија је цијена оскудна у односу на саму ин витро оплодњу, служи само као додатак опћем програму, који омогућава не само да се рађа и рађа, већ и да се подиже здраво дијете.

Како су генетске болести наслеђене?

Не може свака мутација или дефектни знак код родитеља изазвати појаву болести код дјетета. Све зависи од тога да ли је доминантна или рецесивна особина наслеђена од сваког супружника, и која комбинација гена ће дете имати.

Ако се ген који доминира сличним непромењеним преноси на дете, онда постоји 50% ризика да ће се наследна патологија манифестовати. Родитељи са рецесивним геномом болести носе болну генетску особину. Да би дијете развило клиничке симптоме патологије, мора наслиједити два рецесивна гена.

Постоје и болести повезане са сексом. Код женки, двадесет и трећи пар хромозома је КСКС, код мушкараца, КСИ. Ако је у генетском материјалу жене један од хромозома неисправан, онда је због другог блокиран развој болести, али је присутан и носилац патолошког гена. Код мушкараца, И хромозом није у стању да блокира ефекте патолошког Кс хромозома, тако да се болест манифестује у синовима таквог пара, а кћери у 50% су носиоци измењеног гена.

Преимплантацијска генетска дијагноза ембриона помаже да се са 100% тачношћу утврди у којој је комбинацији генетски материјал наслеђен, дете манифестује болест, или ће бити носилац патолошких знакова.

Коме је потребно спровести генетска истраживања?

За ПГД постоје одређене индикације. Препоручује се извођење студије за жене које желе да се рађају након 34 године. У овом узрасту, чак и са природном појавом трудноће, повећава се ризик од добијања бебе са генетским абнормалностима.

Ооцити постепено старе, изложени су различитим негативним факторима током свог живота:

  • лоше навике мајке (пушење, конзумирање алкохола),
  • хроничне болести
  • лечење лековима,
  • штетни радни услови (хемијски реагенси, физички фактори у облику високих температура, вибрације, јонизујуће зрачење, електромагнетна поља),
  • бад ецологи.

Са годинама, неисправна јаја се акумулирају, што повећава ризик преноса патолошких гена на потомство. Ако се такав ембрион пренесе у материцу, онда у већини случајева неће се укоријенити, трудноћа ће бити прекинута побачајом. Или, ако трудноћа напредује, накнадни преглед ће открити патологију која ће постати индикација за прекид. Преимплантацијска дијагноза помаже да се избјегне психолошка траума повезана с побачајом или рођењем инфериорног дјетета. Мушкарац спада у старосну групу ризика старију од 39 година. Ово укључује супружнике са патологијом сперматогенезе.

Женама са уобичајеним побачајима препоручује се и ПГД. Један од родитеља може имати дефект у хромозомима, који утиче на развој ембриона и доводи до побачаја.

Обавезно проучите парове који имају аутосомно доминантну патологију. Њихова дјеца у 50% ће бити носиоци гена или клинички знакови болести.

Такође спроводите истраживање са:

  • 2 или више неуспешних ИВФ покушаја,
  • 3 или више покушаја преношења ембриона високог квалитета код жена млађих од 35 година, које нису завршиле у трудноћи,
  • ризичну групу за касније болести,
  • жељу да дијете буде компатибилно са ХЛА системом за добијање матичних ћелија за лијечење другог дјетета са озбиљном болешћу,
  • рођење детета компатибилно са Рх фактором за спречавање сукоба.

Спроведена према индикацијама, ПГД помаже да се избегне накнадна пренатална дијагноза - амниоцентеза, која смањује ризик од абортуса.

Циљеви студије

На основу индикација за дијагнозу, можете дефинисати њене циљеве:

  1. Искључивање ембриона са абнормалним кариотипом.
  2. Утврђивање узрока неуспешне имплантације током претходног ИВФ-а.
  3. Смањење ризика од бебе са аномалијама од родитеља родитеља.
  4. Идентификација ембриона са предиспозицијом за озбиљне болести.
  5. Имати дијете које је ХЛА усклађено за лијечење брата или сестре.
  6. Смањење ризика од хемолитичке болести код рођења детета са одређеним Рх фактором.

Преимплантацијска генетска дијагностика моногених болести се проводи како би се утврдило:

  • цистична фиброза,
  • Таи-Сацхсова болест,
  • хемофилија А,
  • Дуцхенне миодистропхи,
  • анемија српастих ћелија.

Потрага за хромозомским абнормалностима укључује проучавање девет од њих, који су узрок следећих синдрома:

  • Довн (хромозоми трисомије 21),
  • Патау (13. хромозом),
  • Едвардс (18),
  • Схересхевски-Турнер,
  • Клинефелтер,
  • "Мачји ученици" (22),
  • хромозоми 15, 16, 17.

Такође, генетска претрага вам омогућава да идентификујете многе друге болести.

Дијагностичке технике

За ПГД се користе ембриони или јаја. Али у првом случају, студија је више информативна ембрион има очев генетски материјал који може преносити дефектне гене.

У студији се изводи биопсија једног бластомера у ембриону од 4-10 посто, који је у фази дробљења. То се дешава 3-5 дана. Не наноси се штета будућем фетусу.

Техника се може користити само у ИВФ процедури, у комбинацији са ИЦСИ - вештачко осјемењивање спермом. Ово је учињено тако да се у процесу биопсије бластомера, генетски материјал сперматозоида који није био укључен у оплодњу не узима за проучавање.

Даљи пренос ембриона и управљање трудноћом одвија се као код нормалног ИВФ-а. За анализу је додељено само 2 дана, пресађивање треба да се обави најкасније 5 дана од развоја. Више могућности за дијагнозу у циклусу са криопрезервацијом. Ако извршите биопсију неких ембриона, а затим их сачувате, онда можете сигурно обавити максимално могуће истраживање, а за следећи циклус поново засадити висококвалитетни ембрион.

Развио неколико техника за ПГД.

Користи се за дијагностику нумеричких или структурних хромозомских промена - анеуплоидија и транслокације. Ћелија добијена биопсијом је фиксирана на клизачу, загрејана и охлађена. Када се то догоди, руптура његове љуске и ослобађање цитоплазме. Сегменти ДНК обележени су флуоресцентним сондама - специјалним бојама. Даље, у специјалном флуоресцентном микроскопу, можете бројити одређене хромозоме, идентификовати нормалне и патолошке.

Ланчана реакција полимеразе заснована је на идентификацији специфичних копија ДНА. За почетак, он је денатуриран како би се одвијала двострука нит и добио један фрагмент. Додавањем посебних ензима, количина генетског материјала се постепено удвостручује. То вам омогућава да детектујете дефектна места у нуклеотиду. Техника се користи за тражење моногених болести, када се један или два супружника дефинирају као носиоци дефектних гена или са клиничким знаковима болести.

  • Најновија НГС техника

Новина је преимплантацијска генетска дијагностика у криоциклу методом НГС, уз помоћ које се може проучити свих 23 пара кромосома. Његова прецизност износи 99,9%. Истовремено, у току је проучавање моногених и хромозомских патологија, као и мутација. Техника омогућава разликовање уравнотежених транслокација од нормалног скупа кромосома. Према томе, нема потребе да се понавља биопсија бластомера. Висока аутоматизација процеса елиминише додатне грешке.

Користи и ризици

Употребом генетске анализе ембриона у фази одвајања повећавају се шансе за успешну имплантацију. Доказано, что хромосомные изменения у зародышей увеличивают вероятность выкидыша на раннем сроке, формирование неразвивающейся беременности. В 21% случаев самопроизвольного прерывания беременности, в том числе полученной методом ЭКО, причиной прерывания становится хромосомная патология плода. С возрастом количество аномалий увеличивается в геометрической прогрессии.Ако узмемо у обзир да се жене старије старосне категорије најчешће прибјегавају асистираним репродуктивним технологијама, постаје јасно да дијагностику треба обавити прије пресађивања ембрија.

Добијене информације лекар може да користи током наредних покушаја ИВФ-а, као и да сугеришу разлоге претходних неуспешних покушаја оплодње.

Када се користи ПЦР или флуоресцентна метода, може се испитати само одређени број хромозома. Стога се неки недостаци могу наслиједити.

Дешава се да је током предимплантацијске генетске дијагнозе абнормални ембрион дефинисан као нормалан. У том случају, накнадна пренатална дијагноза ће помоћи да се прецизно дијагностицира патологија. У овој фази развоја науке ПГД не може у потпуности замијенити ово друго. Понекад се генетске аномалије формирају мозаиком. У овом случају, биопсија једног бластомера ће потврдити нормално стање ембриона, а болест ће настати због грешке измењене ћелије.

Оштећење ембриона током биопсије је изузетно ретко, у 0,1% случајева. Такође треба имати на уму да чак и након успешне дијагнозе и пресађивања нормалног ембриона, ИВФ може да пропадне из непознатих разлога. У овом случају, узрок може бити имунолошки поремећај у мајчином телу, недијагностициране болести. Само потпуни преглед у смислу припреме за ИВФ, здрав начин живота повећава шансе да затрудни.

Садржај

Идеја преимплантационе генетске дијагнозе појавила се пре рођења првог ИВФ детета. 1967, Р. Едвардс је објавио чланак (Р. Г. Едвардс) и Р. Гарднер (Р. Л. Гарднеро спровођењу биопсије ембриона зеца за одређивање пола пре имплантације, у којима су аутори предвидели појаву сличних технологија код људи [2]. Међутим, преимплантацијска генетска дијагностика код људи постала је могућа тек почетком 90-их, када је постигнут довољан технолошки ниво ин витро оплодње, те је развијена ланчана реакција полимеразе која је омогућила ДНК анализу у појединачним ћелијама.

Године 1989. први успешан покушај утврђивања пола извршен је ПЦР анализом бластомера узетих из ембриона у фази одвајања (6-8 бластомера) [3]. Прве успешне испоруке након сличног поступка код парова који су били изложени ризику од рецесивног Кс-везаног обољења догодиле су се 1990. године.

Године 1990. дијагностикована је моногена болест прије оплодње, а техника је укључивала ПЦР анализу поларних јајних ћелија [5].

Прво рођење дјетета након преимплантацијске ПЦР дијагнозе моногене болести (цистичне фиброзе) догодило се 1992. године [6].

Након тога, употребљена је флуоресцентна хибридизација ин ситу (ФИСХ) да би се одредио пол ембриона, као и хромозомске абнормалности. Почевши од 2012. године, ФИСХ метода за одређивање хромозомских абнормалности се постепено замењује компаративном геномском хибридизацијом. ПЦР метода је остала неопходна за дијагностику моногених болести.

Преимплантацијска генетска дијагноза је индицирана за парове који имају носиоца кромосомске прерасподјеле или моногене болести. Примери моногених болести укључују цистичну фиброзу, Таи-Сацхс-ову болест, анемију српастих ћелија, хемофилију А, Дуцхеннову мишићну дистрофију и многе друге.

Поред тога, преимплантацијска генетска дијагноза се спроводи код парова са повећаним ризиком од конгениталних аномалија код деце, што није повезано са преносом дијагностикованих мутација. Такви случајеви укључују парове у којима је старост мајке старија од 35 година, а старост оца је старија од 39 година, ако отац има тешке поремећаје сперматогенезе, парови с уобичајеним побачајима, парови с поновљеним неуспјешним покушајима ИВФ-а.

У случају недефинисаног повећаног ризика од рађања бебе са конгениталним аномалијама, предимплантацијска генетска дијагноза се изводи за девет хромозома који су повезани са најчешћим урођеним болестима. То су хромозом 13 (Патау синдром), хромозом 15 (Прадер-Вилли синдром), кромосом 16, хромозом 17, хромозом 18 (Едвардсов синдром), хромозом 21 (Довнов синдром), хромозом 22 (синдром "мачкица"), као и пол хромозоми Кс и И (различите нумеричке аномалије, укључујући Схересхевски-Турнер-ов синдром и Клеинфелтеров синдром).

Преимплантацијска генетска дијагностика проводи се у неким случајевима који нису повезани с могућом генетском патологијом плода, а сврха такве дијагнозе је рођење дјетета с одређеним генетским карактеристикама. Такви случајеви укључују, на примјер, преимплантацијску генетску дијагностику, која се проводи како би се спријечио резусни сукоб.

Постоје случајеви када се комбинује неколико предуслова за преимплантацијску генетску дијагнозу. Један такав примјер је случај када је, користећи преимплантацијску генетску дијагнозу, ХЛА-компатибилан донатор за станичну терапију Фанкони анемије рођен у пробанду [7]. У овом случају, искључена је Фанцонијева анемија и одабран је жељени тип хистокомпатибилности.

Извођење предимплантацијске дијагнозе могуће је само у оквиру циклуса ИВФ третмана, односно, ин витро оплодње са интраплазмичном ињекцијом сперматозоида (ИЦСИ), тј. Сперматозоид се убризгава у јаје "ручно" уз помоћ микрокируршких инструмената. ИЦСИ процедура је неопходна због чињенице да се у нормалном ИВФ-у велики број сперме додаје у јајну ћелију. Затим, приликом прикупљања поларних тела или бластомера, постоји ризик да генетски материјал сперматозоида који није учествовао у оплодњи улази у анализу са ћелијом ембриона.

Припрема за циклус лечења и циклус лечења ИВФ са самим ПГД-ом не разликује се много од уобичајеног циклуса ИВФ третмана:

  1. жена прима хормонске лекове за стимулацију суперовулације,
  2. врши се пункција трансвагиналног фоликула,
  3. оплодња јајних ћелија са сперматозоидима врши се у ембриолошкој лабораторији,
  4. трансфер ембриона у материцу траје 5-6 дана.

Ако је генетски поремећај наслеђен од жене, онда се "здрави" ембриони могу изабрати проласком теста само поларним телима, без додира са самим ембрионом. Такође можете тестирати само бластомере. Или се може извршити секвенцијално проучавање поларних тела, затим бластомера.

Која врста ПГД шеме ће се примењивати за сваки конкретан случај утврђује се након консултација са генетским лекаром или посебно обученим ПГД консултантом приликом планирања ПГД.

У првој подели мејозе, ооцита првог реда је подељена, што резултира формирањем ооцита другог реда и малог првог редукционог тела (обе ћелије са хаплоидним сетом хромозома). У другој подели мејозе, као резултат поделе ооцита другог реда, формирају се једна јајна ћелија и друго редукционо тело. Прво тело за редукцију понекад се дели на две идентичне мале ћелије. Као резултат ових трансформација јајне ћелије првог реда, формирају се једна јајна ћелија и три редукциона тела, где и јајне ћелије и редукционо тело имају хаплоидни скуп хромозома. Дакле, могуће је истражити поларна тела како би се утврдило да ли је јаје наследило генетски дефект.

Након оплодње јајашаца спермом у ембриолошкој лабораторији, ембрион се развија - ћелије се деле. Трећег дана, ембрион се састоји од 6-8 бластомера. Трећег дана сакупља се биолошки материјал за генетичка истраживања - такозвана "биопсија ембриона", односно екстракција једног бластомера из ембриона (а понекад и поларних тела) уз помоћ специјалних микротуба. Процедура не нарушава даљи развој ембриона. Док се врши генетичка дијагностика, ембриони настављају да се развијају у одговарајућој подлози за културу док се не пребаце у материцу 5. дана развоја. До тог времена, ембрион мора да дође до фазе бластоцисте.

Пре трансфера, ембриолог процењује структуру и облик ембриона. Резултат генетске дијагнозе је упоређен са морфологијом ембриона и направљен је закључак о томе који се ембриони препоручују за прелазак у материцу. За трансфер, ембриони са најбољим морфолошким карактеристикама се бирају без генетских поремећаја.

Анализа се проводи у врло кратком времену. На располагању су само 2 дана за анализу бластомера, јер ембрион не може да настави свој развој изван мајчиног тела изван фазе бластоциста (5. дан након оплодње), стога се студија мора извести у овом кратком времену.

Алтернативни приступ је да се изврши ПГД у криоциклу. У овом случају, биопсија је извршена петог дана развоја, а одмах након тога ембриони су подвргнути криопрезервацији. У наредном месецу се врши генетска дијагноза и препоручени ембриони без мутација се преносе у материцу током следећег циклуса. Пракса неповезаног циклуса има неколико предности: мањи ризик од претеране стимулације, више материјала и времена за анализу, мање трауматичне процедуре за биопсију ембриона. Недостатак криоцикла је дужи период од почетка стимулације до трансфера ембриона [1].

  1. За нумеричке и структурне хромозомске абнормалности користи се ФИСХ (флуоресцентна хибридизација) ин ситу). Обично се спроводи за анализу нумеричких поремећаја три, пет или седам хромозома, најчешће хромозома 13, 18, 21, Кс и И.
  2. Модерна алтернатива ФИСХ методи је компаративна геномска хибридизација на микрочиповима (ГХС). ГХС вам омогућава да тестирате све хромозоме у исто време.
  3. Код извођења ПГД моногених болести користи се ПЦР метода.

Метода флуоресцентне хибридизације ин ситу (ФИСХ) је метода цитогенетске анализе која се користи за идентификацију и локализацију специфичних ДНК секвенци на метафазним хромозомима и у међуфазним језграма. Овај метод користи ДНК пробе, које су нуклеотидна секвенца ограничене величине која је комплементарна специфичном региону нуклеарне ДНК. Сонда носи "ознаку", то јест, садржи нуклеотиде повезане са флуорофором (молекул способан за флуоресценцију). После поступка хибридизације у случају формирања хибридне молекуле ДНК пробе и циљне ДНК на цитогенетском препарату који се истражује, луминисценција специфичних ДНК секвенци на хромозомима или језграма може се посматрати коришћењем флуоресцентног микроскопа.

Ланчана реакција полимеразе је метода заснована на вишеструком селективном копирању одређене секције ДНК употребом ензима у вештачким условима (ин витро). Када се то деси, копира се само подручје које задовољава специфициране услове, и само ако је присутно у узорку који се испитује.

Loading...